ⅠNuklein kislotasiikirish
Nuklein kislota dezoksiribonuklein kislota (DNK) va ribonuklein kislota (RNK) ga bo'linadi, ular orasida RNK turli funktsiyalariga ko'ra ribosoma RNK (rRNK), xabarchi RNK (mRNK) va transfer RNK (tRNK) ga bo'linadi.DNK asosan yadro, mitoxondriya va xloroformda, RNK esa sitoplazmada tarqalgan.Gen ekspressiyasining moddiy asosi sifatida nuklein kislota ekstraktsiyasi molekulyar biologiya tadqiqotlari va klinik molekulyar diagnostikada juda muhim rol o'ynaydi.Nuklein kislota ekstraktsiyasining kontsentratsiyasi va tozaligi keyingi PCR, sekvensiya, vektor qurilishi, ferment hazm qilish va boshqa tajribalarga bevosita ta'sir qiladi.
Ⅱ Nuklein kislotani olish va tozalash usuli
① Fenol/xloroform olish usuli
Fenol / xloroform ekstraktsiyasi DNK ekstraktsiyasining klassik usuli bo'lib, u asosan namunalarni davolash uchun ikki xil organik erituvchilardan foydalanadi, suv fazasida DNKga asoslangan nuklein kislotani, organik fazadagi lipidlarni va ikki faza orasidagi oqsillarni eritadi.Ushbu usul arzon narxlardagi, yuqori tozalik va yaxshi ta'sirning afzalliklariga ega.Kamchiliklari - murakkab operatsiya va uzoq vaqt.
② Trizol usuli
Trizol usuli RNK ekstraktsiyasining klassik usuli hisoblanadi.Trizol usuli suvli fazaga va xloroform bilan santrifüjdan so'ng organik fazaga bo'linadi, bunda RNK suvli fazada eriydi, suvli faza yangi EP trubkasiga o'tkaziladi, izopropanol qo'shilgandan keyin cho'kma olinadi, keyin esa etanolni tozalash.Bu usul hayvon to'qimalari, hujayralari va bakteriyalardan RNK olish uchun javob beradi.
③ Santrifüj ustunli tozalash usuli
Santrifüj ustunini tozalash usuli DNKni maxsus kremniy matritsali adsorbsion materiallar orqali adsorbsiyalashi mumkin, RNK va oqsil esa muammosiz o'tishi mumkin, so'ngra nuklein kislotani ajratish va tozalash uchun nuklein kislotani, past tuzli yuqori PH qiymatini birlashtirish uchun yuqori tuz past PH dan foydalaning.Afzalliklar yuqori tozalash konsentratsiyasi, yuqori barqarorlik, organik erituvchiga ehtiyoj yo'qligi va arzonligidir.Kamchilik shundaki, uni bosqichma-bosqich, ko'proq operatsiya bosqichlarida santrifüj qilish kerak.
④ Magnit boncuklar usuli
Magnit boncuklar usuli hujayra to'qimalarining namunasini lizat orqali ajratish, namunadagi nuklein kislotani chiqarish, so'ngra nuklein kislota molekulalari magnit boncuk yuzasida maxsus adsorbsiyalanadi, shu bilan birga oqsillar va shakar kabi aralashmalar qoladi. suyuqlik.Hujayra to'qimalarining bo'linishi, magnit boncukning nuklein kislotasi bilan bog'lanishi, nuklein kislotasi bilan yuvilishi, nuklein kislotasi elusiyasi va boshqalar orqali nihoyat sof nuklein kislota olinadi.Afzalliklari oddiy operatsiya va qisqa vaqt foydalanish, bosqichma-bosqich santrifüjga muhtoj bo'lmasdan.U past texnik talablarga ega va avtomatik va ommaviy ishlashni amalga oshirishi mumkin.Magnit boncuk va nuklein kislotaning o'ziga xos birikmasi ekstraksiya qilingan nuklein kislotani yuqori konsentratsiya va tozalikka ega qiladi.Kamchilik shundaki, hozirgi bozor narxi nisbatan qimmat.
⑤ Boshqa usullar
Yuqoridagi to'rtta usuldan tashqari, qaynoq kreking, konsentrlangan tuz usuli, anion yuvish usuli, ultratovush usuli va fermentativ usul va boshqalar mavjud.
Ⅲ Nuklein kislota ekstraktsiyasining turi
Foregene dunyodagi yetakchi Direct PCR platformasiga, ikki ustunli RNK izolyatsiya platformasiga (faqat DNK + faqat RNK) ega.Asosiy mahsulotlarga DNK / RNK izolyatsiya to'plamlari, PCR va to'g'ridan-to'g'ri PCR reagentlari molekulyar laboratoriya reagentlari kiradi.
① Umumiy RNK ekstraktsiyasi
Jami RNK ekstraktsiyasi namunalari qon, hujayralar, hayvon to'qimalari, o'simliklar, viruslar va boshqalarni o'z ichiga oladi. Umumiy RNKning yuqori tozaligi va yuqori konsentratsiyasi RT-PCR, chip tahlilida, in vitro tarjimasida ishlatilishi mumkin bo'lgan umumiy RNK ekstraktsiyasi orqali olinishi mumkin, molekulyar klonlash, Dot Blot va boshqa tajribalar.
Foregene bilan bog'liqRNK izolyatsiyasi to'plamlari
Hayvonlarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami--Turli hayvonlar to'qimalaridan yuqori toza va sifatli umumiy RNKni tez va samarali ravishda ajratib oling.
Hujayra umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami--Har xil ekilgan hujayralardan yuqori darajada tozalangan va sifatli umumiy RNKni 11 daqiqada olish mumkin.
O'simliklarning umumiy RNK izolyatsiyasi to'plami--Polisakkarid va polifenol miqdori past bo'lgan o'simlik namunalaridan yuqori sifatli umumiy RNKni tezda ajratib oling.
Virusli RNK izolyatsiyasi to'plami--Plazma, sarum, hujayrasiz tana suyuqliklari va hujayra madaniyati supernatantlari kabi namunalardan virusli RNKni tezda ajratib oling va tozalang.
② Genomik DNK ekstraktsiyasi
Genomik DNK ekstraktsiyasi namunalari tuproq, najas, qon, hujayralar, hayvon to'qimalari, o'simliklar, viruslar va boshqalarni o'z ichiga oladi. Genomik DNK ekstraktsiyasi ferment hazm qilish, DNK kutubxonasini qurish, PCR, antikor tayyorlash, Western blot gibridizatsiya tahlili, gen chipi, yuqori -o'tkazuvchanlik ketma-ketligi va boshqa tajribalar.
Foregene bilan bog'liqDNK izolyatsiyasi to'plamlari
Hayvon to'qimalarining DNK izolyatsiyasi to'plami--Hayvon to'qimalari, hujayralari va boshqalar kabi ko'plab manbalardan genomik DNKni tez ajratib olish va tozalash.
Qon DNK Midi to'plami (1-5 ml)- Antikoagulyatsion qondan (1-5 ml) yuqori sifatli genomik DNKni tezda tozalang.
Bukkal tampon/FTA kartasi DNK izolyatsiyasi to'plami--Bukkal tampon/FTA karta namunalaridan yuqori sifatli genomik DNKni tezda tozalang.
O'simlik DNK izolyatsiyasi to'plami--O'simlik namunalaridan (shu jumladan, polisaxaridlar va polifenol o'simliklari namunalaridan) yuqori sifatli genomik DNKni tezda tozalang va oling.
③ Plazmid ekstraktsiyasi
Plazmid hujayralardagi dumaloq kichik molekula DNKning bir turi bo'lib, u DNK rekombinatsiyasi uchun umumiy tashuvchidir.Plazmidni olish usuli RNKni olib tashlash, plazmidni bakterial genomik DNKdan ajratish va nisbatan toza plazmidni olish uchun oqsil va boshqa aralashmalarni olib tashlashdir.
Umumiy plazmid mini to'plami- Transformatsiya va ferment hazm qilish kabi muntazam molekulyar biologiya tajribalari uchun yuqori sifatli plazmid DNKni o'zgartirilgan bakteriyalardan tezda tozalang.
④ Boshqa ekstraktsiya turlari, miRNK ekstraktsiyasi va boshqalar.
Hayvonlarning miRNK izolyatsiyasi to'plami- Har xil hayvon to'qimalari va hujayralaridan 20-200 nt miRNK, siRNK, snRNKning kichik RNK qismlarini tez va samarali ajratib oling.
Ⅳ Nuklein kislotani olish va tozalash natijasiga qo'yiladigan talablars
① Nuklein kislotaning birlamchi tuzilishining yaxlitligini ta'minlash.
② Oqsillar, qandlar, lipidlar va boshqa makromolekulalar aralashuvini kamaytiring
③ Nuklein kislota namunalarida fermentni inhibe qila oladigan organik erituvchi yoki yuqori konsentratsiyali metall ionlari bo'lmasligi kerak.
④ DNKni olishda RNK va boshqa nuklein kislotalarning ifloslanishini yo'q qilish kerak va aksincha.
Yuborilgan vaqt: 24-noyabr-2022
